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高危型人乳头瘤病毒感染检测中PCR技术的运用

作者:原创论文网 时间:2016-02-02 18:30 加入收藏
摘要

  人乳头瘤病毒( HPV) 与宫颈癌以及宫颈上皮样瘤变( CIN) 发生存在密切关联性,而依照致瘤性差异可将其分为低危以及高危两种,分别有一定几率引发良性肿瘤以及恶性肿瘤[1]。本文基于此探讨多重实时 PCR 技术对高危型人乳头瘤病毒感染检测的临床意义,以为临床指导。现报告如下:

  1、资料与方法

  1. 1、一般资料 焦作市妇幼保健院 2012 年 7 月—2013 年 12 月期间疑似宫颈病变以及感染 HPV 病例120 例,年龄 28 ~ 71 岁,平均( 41. 2 ± 6. 7) 岁。检查开始前3d 内禁用阴道内药物以及阴道冲洗; 检查时间均避开经期,同时24h 内禁性行为。

  1. 2、方法 ①HC2 检测法: 检测系统由美国 Di-gene 公司提供,检测项目涉及 13 种高危型 HPVDNA,阳性评定标准[2]如下: 待测样本相对光单位( RLU) 与标准阳性对照 RLU 比值超出标准参考值,即当样本 RLU/标准阳性对照 RLU > 1. 0 则可判定为阳性。②多重实时 PCR 检测法: 本次所用仪器为德国生产的 ABI7300 荧光定量基因扩增仪,所用检测试剂提供方均为上海蓝基生物有限公司。对 13 种高危型 HPV DNA 进行检测,并抽取 HC2 检测样本,将其酸碱值调至 7. 4,取 HC2 待测样本 2 ml 与 PCR 反应液混合均匀,然后通过荧光定量 PCR 仪器进行扩增,阳性评定标准[3]如下:样本循环阈值低于 37 即可判定为阳性。

  1. 3、观察指标 统计多重实时 PCR、HC2 法检测高危型 HPV 以及 亚型感染情况。

  1. 4、统计学分析 采用 SPSS16. 0 软件,计量资料以( x珋 ± s) 表示,计量资料的对比采用 t 检验。计数资料以百分比表示并应用 χ2检验,P < 0. 05 为差异具有统计学意义。

  2、结 果

  2. 1、高危型 HPV 检测结果对比 在检测高危型HPV 方面,本次研究所用两种检测方法效能近似,差异并无统计学意义( P >0. 05) ; 与湿疣以及宫颈炎相比,多重实时 PCR 在鳞状细胞癌、低度鳞状上皮内病变( LSIL) 以及高度鳞状上皮内病变( HSIL)阳性检出率更高,差异具有统计学意义 ( P <0. 05) ; 与湿疣以及宫颈炎相比,HC2 检测法在鳞状细胞癌、LSIL 以及 HSIL 阳性检出率更高,差异具有统计学意义( P <0. 05) ,见表 1。

表 1 两种方法检测高危型 HPV 结果对比( n,%)
表 1 两种方法检测高危型 HPV 结果对比( n,%)

  2. 2、多重实时 PCR 检测高危型 HPV 亚型感染结果 120 例患者,PCR 检测阳性率为 84. 2% ( 101/120) ,其中 26 例为 16 型,占 25. 7% ; 21 例为 18型,占 20. 8%; 10 例为 31 型,占 9. 9%; 5 例为 33型,占 5. 0%; 10 例为 45 型,占 9. 9%; 4 例为 52型,占 4. 0%; 4 例为 56 型,占 4. 0%; 21 例为 58型,占 20. 8%。16 型、18 型以及 58 型感染率更高,与其他亚型感染率相比差异具有统计学意义( P <0. 05) 。

  3、讨 论

  多重实时 PCR 检测技术以一项以核酸杂交为基础,并被广泛应用于 mRNA 检测的基因技术,可有效减少聚合酶链式反应后的相关操作,同时在浓度不同的 mRNA 对比方面具有较高的动力学优势[4]。实时荧光定量 PCR 则是将探针或者染料等荧光基团加入 PCR 反应体系,通过荧光信号积累来对 PCR 整体进程进行实时监测,DNA 双链中渗入的荧光染料发出荧光信号,为荧光信号和 PCR 产物二者同步增加提供了有效保障,而荧光探针则可在探针的5’端、3’端分别标记出荧光报告基团、淬灭基团各一,二者彼此作用,形成能量传递结构。其中淬灭基团可有效抑制或者吸收来自 5’端荧光基团的荧光; 而一旦超出一定距离,则抑制效果消失,此时荧光信号随之增强,继而被监测系统检出并接收[5]。

  我们通过观察检出荧光信号强弱程度,即可对 HPV扩增后获得的基因产物做出高效检测。本次研究结果表明,在检测高危型 HPV 方面,本次研究所用两种检测方法效能近似,差异并无统计学意义( P > 0. 05) ; 而与湿疣以及宫颈炎相比,鳞状细胞癌、低度鳞状上皮内病变( LSIL) 以及高度鳞状上皮内病变( HSIL) 阳性检出率更高,差异具有统计学意义( P <0. 05) 。

  综上所述,多重实时 PCR 检测方法易自动化,具有较好的重复性,检测快速简便,同时具有敏感性、特异性以及产率高的特点,DNA 扩增产物检测准确率高,适用监测高危型 HPV 持续感染以及大规模筛查,临床应可予以推广使用。

  参考文献
  [1] 邹冰玉,浦海鹰,李丹,等. 210 例高危型人乳头瘤病毒感染检测及宫颈病变影响因素的探讨[J]. 实用妇产科杂志,2013,29( 12) : 938-940.
  [2] 胡仲翔,李德群,岳喜成,等. 乳腺癌中高危型人乳头瘤病毒感染及其与微血管密度的相关性[J]. 临床与实验病理学杂志,2014,30( 3) : 261-263.
  [3] 魏炜,宋韫韬,张宝云,等. 喉鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒感染的检测分析[J]. 中华实验和临床病毒学杂志,2013,27( 1) : 22-24.
  [4] 邢志艳,徐东艳,郝百连,等. 955 例妇科就诊妇女人乳头瘤病毒感染筛查结果分析[J]. 生殖医学杂志,2013,22( 12) :951-953.
  [5] 聂双双,丁显平,陈祖翼,等. 成都地区人乳头瘤病毒感染亚型、年龄分布、多重感染及相关趋势研究[J]. 国际检验医学杂志,2013,34( 22) : 3026-3028.

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